ANNEXES

Annexe 1. Préparation de milieu de culture des souches de rhizobium
a) Préparation du bouillon du Yeast-Mannitol Brouth(YMB)
Constituants:
Nom ou formule chimique
Quantité
Mannitol
10 g
K2HPO4
0.5 g
MgSO4.7H2O
0.2 g
NaCl
0.1 g
Yeast Extract
0.5 g
Eau distillée
1.0 litre
Préparation proprement dite:
1. Ajouter le mannitol et les sels à 1L d’eau distillée,
2. Dissoudre le mélange avec un agitateur,
3. Ajuster le pH à 6.8 avec le NaOH 0.1 N,
4. Stériliser le tout dans un autoclave à 121oC pendant 15 minutes.
b) Préparation du Yeast Mannitol Agar (YMA)
Constituants:
Yeast Mannitol Broth (YMB): 1.0 litre
Agaragar: 15 g
1. Préparer leYMB comme décrit ci haut,
2. ajouter l’agar agar et agiter, stériliser à l’autoclave
3. Après stérilisation, agiter de nouveau pour assurer une mixture de l’agar avec l’YMA.
4. Incorporation des indicateurs colorés dans le milieu :
- pour le bleu de Bromthymol (BTB): préparer une solution stock de 0.5 g de BTB/100ml d’éthanol, ajouter 5ml de solution stock/ litre de YMA.
- Pour le Congo Rouge (CR): Préparer une solution stock de 0.25g de CR/100ml, ajouter 10 ml de stock/ litre de YMA.
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Annexe 2 : Solution, sans azote, de nutriments des plantes : solution de Broughton et Dilworth (adoptée de Woomer et al, 2011).
a) Constituants :
Solutions stock
Eléments
M
Forme
g/L
M
1
Ca
1000
CaCl2•2H2O
294,1
2,0
2
P
500
KH2PO4
136,1
1,0
3
Fe
10
Fe-citrate
6,7
0,02
Mg
250
MgSO4•7H2O
123,3
0,5
K
250
K2SO4
87,0
0,5
Mn
1
MnSO4•H2O
0,338
0,002
4
B
2
H3BO3
0,247
0,004
Zn
.5
ZnSO4•7H2O
0,288
0,001
Cu
.2
CuSO4•5H2O
0,100
0,0004
Co
.1
CoSO4•7H2O
0,056
0,0002
Mo
.1
Na2MoO2•2H2O
0,048
0,0002
b) Préparation :
Pour chaque 10 litres de solution de nutriments à préparer, ajouter 5,0mL de chaque solution stockée 1 à 4 à 5,0 litres d’eau stérilisée puis diluer à 10 litres. Ajustez le pH à 6,6-6,8 en utilisant le NaOH 1 N. Pour les traitements contrôle +N, l’urée peut être appliquée à raison de 0,5g par pot.
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Annexe 3 : Caractéristiques des souches de rhizobium sur les milieux de culture
Caractéristiques de la culture
Souche
Croissance
CR YMA
BTB YMA
NAC37
L
FA
NR
NAC46
L
NA
B
NAC49
L
A
J
NAC52
L
FA
B
NAC58
L
NA
B
NAC80
R
NA
J
NAC85
TL
NA
B
Sr1
L
NA
J
Sr2
R
A
J
Sr3
R
FA
J
Sr4
R
A
J
Sr5
R
FA
J
Sr6
R
FA
J
Sr7
R
A
J
Sr8
L
A
J
Sr9
L
A
J
Sr10
L
A
J
Sr11
R
NA
J
Sr12
L
A
J
Sr13
L
FA
J
Sr14
L
NA
J
Sr15
R
A
J
Sr16
L
A
J
Sr17
R
NA
J
Sr18
R
A
J
Sr19
L
NA
J
Sr20
L
A
J
30S
R
A
J
12.
L
FA
J
4L
L
A
J
Légende :
Croissance : L = lente ; TL = très lente ; R = rapide
CR YMA: FA = Faible absorption ; NA= Non absorption ; A = Absorption
BTB YMA : NR = Non réaction ; B = Bleue ; J = Jaune
51
TABLE DE MATIERE
INTRODUCTION………………………………………………………………………. Erreur ! Signet non défini.
CHAP I : GENERALITE SUR LE HARICOT……………………………………… Erreur ! Signet non défini.
I.1. ORIGINE, CLASSIFICATION ET DISTRIBUTION…………………………. Erreur ! Signet non défini.
I.1.1. Origine…………………………………………………………………………... Erreur ! Signet non défini.
I.1.2. Classification…………………………………………………………………... Erreur ! Signet non défini.
I.1.3. Distribution……………………………………………………………………. Erreur ! Signet non défini.
I.2. MORPHOLOGIE ET SYSTEMATIQUE………………………………………. Erreur ! Signet non défini.
I.3. IMPORTANCE DU HARICOT………………………………………………….. Erreur ! Signet non défini.
II.5. LA FIXATION BIOLOGIQUE DE L’AZOTE………………………………… Erreur ! Signet non défini.
II.5.1. Généralités ……………………………………………………………………..Erreur ! Signet non défini.
II.5.2. Les bactéries fixatrices d’azote……………………………………………. Erreur ! Signet non défini.
II.5.3. Le cas des légumineuses…………………………………………………… Erreur ! Signet non défini.
52
II.6 BESOINS DU HARICOT………………………………………………………. Erreur ! Signet non défini.
II.6.1 L’AZOTE………………………………………………………………………… Erreur ! Signet non défini.
II.6.2. LE PHOSPHORE ……………………………………………………………..Erreur ! Signet non défini.
II.6.3. LE POTASSIUM……………………………………………………………… Erreur ! Signet non défini.
CHAPITRE II. MILIEU, MATERIEL ET METHODES………………………….. Erreur ! Signet non défini.
MILIEU………………………………………………………………………………….. Erreur ! Signet non défini.
MATERIEL……………………………………………………………………………… Erreur ! Signet non défini.
II.3. METHODE……………………………………………………………………….. Erreur ! Signet non défini.
II.3.1. Test de présomption et authentification des isolats………………… Erreur ! Signet non défini.
II.3.2. Identification des souches effectives à la croissance et la nodulation du haricot en conditions de serre………………………………………………… Erreur ! Signet non défini.
II.3.4. Analyse des données………………………………………………………… Erreur ! Signet non défini.
CHAP III : PRESENTATION DES RESULTATS ET LEUR DISCUSSION….. Erreur ! Signet non défini.
53
III.1. CARACTERISATION DES SOUCHES DE RHIZOBIUM SUR LES MILIEUX DE CULTURE…………………………………………………………….. Erreur ! Signet non défini.
III.2. EFFET DES SOUCHES SUR LES PARAMETRES VEGETETIFS DE LA PLANTE………………………………………………………………………………… Erreur ! Signet non défini.
III.2. EFFET DES SOUCHES SUR LES PARAMERTES DE NODULATION DE LA PLANTE…………………………………………………………………………….. Erreur ! Signet non défini.
CONCLUSION ET RECOMMANDATION………………………………………… Erreur ! Signet non défini.
REFERENCE BIBLIOGRAPHIQUES……………………………………………… Erreur ! Signet non défini.
ANNEXES………………………………………………………………………………. Erreur ! Signet non défini.
Annexe 1. Préparation de milieu de culture des souches de rhizobium……………………………………………………………………………… Erreur ! Signet non défini.
Annexe 2 : Solution, sans azote, de nutriments des plantes : solution de Broughton et Dilworth (adoptée de Woomer et al, 2011). ……………….Erreur ! Signet non défini.
Annexe 3 : Caractéristiques des souches de rhizobium sur les milieux de culture…………………………………………………………………………………. Erreur ! Signet non défini.