CHAPITRE III. MATERIEL ET METHODES

III.1.  Type d’étude                           

Il s’agit d’une étude analytique de contrôle de la conformité des préparations commerciales de vitamine C sous la forme injectable vendues dans la ville de Bukavu, cas spécifique de celles distribuées dans les officines de la commune de Kadutu.

III.2.  Cadre d’étude

Ce travail s’est effectué à Bukavu, chef-lieu de la province du Sud-Kivu/RD Congo. Les échantillons analysés ont été récoltés dans la commune de Kadutu et leur analyse s’est déroulée dans le laboratoire de la section technique pharmaceutique de l’ISTM/Bukavu localisé dans la commune.

III.3.  Collecte d’Echantillons et Critère d’inclusion

Une descente dans toutes les officines de la commune de Kadutu nous a permis de collecter les échantillons par une technique d’échantillonnage aléatoire visant les préparations de vitamine c injectable de différentes firmes pharmaceutiques. Deux types de vitamine c injectables  seulement ont été répertoriés, il s’agit des échantillons de la firme NEWCESAMEX et ceux de la firme SHIKINA.

Les critères d’inclusion étaient la forme pharmaceutique liquide en ampoule pour injection, la différence des firmes pharmaceutiques de fabrication, la date de validité en cours.

Les spécifications relatives aux échantillons collectés sont reprises dans le tableau 1 suivant.

Tableau 1 : Caractéristiques des échantillons sélectionnés

Nom	Dosage	Forme	Couleur	Provenance	Nombre	Date de per	N° de lot
Vit C	500mg/5ml	Inj.	Limpide	CESAMEX	4 Amp.	Mars 2018	150352
Vit C	500mg/5ml	Inj.	Limpide	SHIKINA	4 Amp.	Janv. 2019	A20140501

III.4. Paramètres d’étude

L’analyse de la qualité s’est effectuée à travers le contrôle des paramètres suivants :

• Aspect externes et caractéristiques organoleptiques.
• L’identification et dosage de la vitamine C dans la forme pharmaceutique.

III.5. Matériels et réactifs

Les matériels et réactifs suivants ont été utilisés :

Matériels : Burette graduée,  pipettes jaugées, Erlenmeyer, agitateur magnétique, bécher, ballons, balance de précision, Picette, verre de montre et statif, etc.

Réactifs : Acide chlorhydrique 0,1M, Solution de di-iode 5.10^-2mol/L, Solution d’empois d’amidon et acide sulfurique 10%.

III.6. Méthodologie

La méthode employée est un titrage direct tel que décrit dans la pharmacopée Britannique. L’iode titrant est déversé progressivement sur l’acide ascorbique et une réaction d’oxydoréduction se produit dans le milieu réactionnel dont l’oxydation totale de l’acide ascorbique est marquée par le virage au bleu-violet.

III.6.1. Aspects externes et organoleptiques

Par contrôle visuel on a noté les éléments de l’emballage primaire de conditionnement et de l’étiquette des échantillons sélectionnés. Ce sont des renseignements sur le nom du produit, le dosage, les dates de fabrication et de péremptions, numéro de lot, nom du fabricant, composition du produit, etc.

Quant aux caractères organoleptiques, les organes de sens nous ont également permis de découvrir : l’état des échantillons notamment leur couleur, l’odeur et le goût, l’étanchéité de l’emballage primaire de conditionnement, etc.

III. 6. 2.  Identification

Cette identification de la vitamine C dans les échantillons s’est effectuée par spectrophotométrie UV-visible selon le mode opératoire suivant :

• Mettre 1ml de la préparation contenant 100mg de la vitamine C dans un ballon jaugé de 100ml,
• Diluer avec de l’eau distillée jusqu’au trait de jauge,
• Prélever 1ml de cette solution et le placer dans un ballon jaugé de 100 ml,
• Diluer avec 10ml d’HCl 0,1M et porter au volume avec de l’eau.
• Tirer un volume de cette solution et lire l’absorbance à 243 nm
• L’absorbance spécifique doit varier entre 545 et 585. (12)

III.6.3. Mode opératoire de dosage

• Dans un bécher, dissoudre un prélèvement contenant 150mg de la vitamine C dans un mélange de 10ml de H₂SO₄ 10% et 80ml d’eau distillée.
• Ajouter 1ml d’empois d’amidon et titrer avec la solution de di-iode 0,05M jusqu’au virage au bleu-violet persistant. 
• 1ml de di-iode 0,05M équivaut à 8,81mg de vitamine C (12)

III.6.4. Préparation des réactifs

1. Solution de di-iode 5.10^-2mol/L

• Peser 12,5g de di-iode et 20g de KI à l’aide d’une balance ;
• Triturer le di-iode et le KI avec un volume d’eau distillée dans un ballon de 100ml,
• Agiter vigoureusement pendant une dizaine de minutes,
• Ajouter progressivement de l’eau tout en agitant jusqu’à la dissolution totale de l’iode ;
• Porter au volume jusqu’à 100ml avec l’eau distillée.

1. Solution d’empois d’amidon

- Malaxer 1g d’amidon soluble et 80 ml d’eau chaude ;

- Ajouter 2g de NaCl et  mélanger jusqu’à ce que le mélange soit limpide ;

- Porter au volume avec 20ml d’eau bouillante ;

- Utiliser directement la solution après préparation.

1. Acide Sulfurique 10%

Préparation de cette solution à partir de la solution concentrée 99% (H₂SO₄ 99%).

     Soit à préparer 50ml de solution comme suit :

          NCxVC = NDxVD

99xVC=50x10

VC= 50x10/99=5,050ml= 5ml

Soit à prélever 5ml de l’acide sulfurique concentré a été dilué dans 50ml d’eau distillée.

1. Acide chlorhydrique 0,1M

Cette solution diluée a été réalisée à partir de HCl commercial de 37%, densité 1,19 et

Mm=36,46g/mol.

• On a d’abord déterminé la concentration molaire de la solution HCl commercial comme suit:

N= d x % x 10 x Z/Mm = 37 x 1,19 x 10/36,46 = 12N

On a ensuite  préparé HCl 1N, puis HCl 0,1N

VC x NC = VD x ND

12VC=100 x 1N

VC = 100/12 = 8,3ml

On a dilué 8,3ml de la solution concentrée dans 100ml  de solution finale pour obtenir la solution HCl 1N et à partir de cette dernière on a obtenu la solution  HCl 0,1N Comme ci-dessous.

NCxVC = NDxVD

1VC = 100 x 0,1N 

VC = 100 x 0,1= 10ml

Ainsi dans un ballon jaugé de 100ml et y placer 10ml de HCl 1N et le diluer avec l’eau distillée jusqu’au trait de jaugé pour avoir la solution HCl 0,1N.

III.6.5. Impact prévu

Nous avons évalué la conformité des préparations injectables des vitamines C pour mettre en garde la population sur la qualité de certains médicaments vendus dans les pharmacies une fois non conforme aux normes.